（1）常用动物瘤株及动物的选择目前在新药有效性及可靠性评价中，常用人体肿瘤细胞株有人肝癌SMM（C－7721细胞，人肝癌NCI－H460细胞、人肺癌A549细胞，人胃癌MGC－803细胞、人胃癌SGC－7901细胞、人肝癌QGY－7701细胞、人肝癌Bel－7402细胞、人乳腺癌MCF－7细胞、人宫颈癌Hela细胞、人黑色素瘤MV3细胞、人结肠癌CL187／CCLl87细胞等。一般采用裸小鼠皮下接种的模型。
裸小鼠为纯合子，表现为无毛，无胸腺。由于其胸腺先天性缺陷，T细胞缺乏。易于接受异种移植。但也由于其免疫力低下，易受微生物感染，因此应在无特殊病原（specific pathogens free．SPF）条件下饲养。
现在已建立的造血系统肿瘤模型有人早幼粒B急性淋巴白血病NALM－6、人肥大性细胞白血病HMC－1、人急性髓细胞性白血病、人急性早幼粒白血病NB4腹水瘤模型等。由于成年裸小鼠还具有NK细胞，因此造血系统肿瘤很难在裸小鼠体内移植成功，须使用重度联合免疫缺陷变异系SCID或NOD／SCID小鼠。造血系统肿瘤模型多采坩腹腔接种，接种的细胞量为10的5次方～10的7次方个，也可选择静脉接种的方式。
动物必须健康，符合等级动物要求，同批实验中治疗组与对照组性别必须相同。小鼠体重18～22g，每组动物至少6只。
（2）实验方法及疗效评价
①皮下接种模型
【实验方法】在药物研究过程中，人体肿瘤细胞的来源大致可分为两类，一类是人的癌细胞株，一类是源于人体肿瘤组织块的癌细胞。人的肿瘤细胞株可以从细胞库或其他实验室得到；而人体肿瘤组织块的癌细胞则要从临床肿瘤患者体内获得，移植后一般应在裸小鼠体内传2～3代，待其稳定生长后再用于体内抗肿瘤实验。接种方法如下。
小块瘤体接种法：选择肿瘤生长旺盛且无破溃的裸小鼠，颈椎脱位处死。在无菌条件下，用碘酒、乙醇消毒动物皮肤，从动物体中剥离取出肿瘤后，剔除非肿瘤组织和坏死组织，选取生长良好且无变性坏死、呈淡红色（黑色素瘤则呈黑色或黑紫色）、鱼肉状的瘤组织，切成5mm×5mm×5mm的小块，在裸小鼠的腋下剪开一个小口，用无钩眼科镊子夹住小块，送入切口内皮；也可使用套管针接种于裸小鼠一侧或双侧腋窝皮下。
腋下部皮肤松弛，能使肿瘤生长得较大，裸小鼠的寿命也可延长。但如接种后的裸小鼠未能形成肿瘤，此时在原动物体内再重新接种也难成功，必须更换动物。
肿瘤细胞悬液接种法：将选取的肿瘤组织置于玻璃匀浆器中，加入无菌生理氯化钠溶液，研磨后，经滤网点过滤成单个的细胞悬液，用台盼蓝染色法计数活细胞数，使每ml中含细胞1×10的6次方～1×10的7次方个，用1ml注射器进行皮下接种，一般接种于腋下部皮下，接种量为0．2ml。
制备肿瘤悬液在研磨时必须使研磨杵向同一方向转动，不可反向交替研磨，防止破坏完整的肿瘤细胞。
培养细胞动物体内移植法：将培养至快要融合的单层细胞（对数生长期）用0．25％的胰蛋白酶消化后，经用PBS或生理氧化钠溶液以1000r／min经10min离心两次，洗掉细胞中胰蛋白酶和培养液中的血清成分，然后用台盼蓝染色法计数活细胞数，用生理氯化钠溶液将肿瘤细胞浓度稀释成每ml中含细胞1×10的6次方～1×10的7次方个，将细胞悬液置于冰上，用1ml注射器尽快进行皮下接种，接种量为0．2ml。
接种完成后，每周2～3次用游标卡尺测量移植瘤的3个互相垂直的直径a、b、c（包括皮肤的厚度在内），以公式V＝π／6×a×b×c计算肿瘤体积，同时称小鼠体重。待肿瘤生长至100～300mm的3次方后，剔除植瘤未生长的裸小鼠，将动物随机分组。
分组当日开始给药，根据不同药动学和毒性反应等确定给药方案，一般细胞毒性抗肿瘤药物剂量按1：2：4设置，大剂量一般使用LD10或接近LD10的剂量。每5或7天重复给药较为理想。给药途径应与推荐临床用药的途径相同。
【疗效评价】
测量实体瘤生长的方法，主要包括测定肿瘤的重量和测量肿瘤的体积。
瘤重：通常于停药之后次日处死动物，立即剥离取出瘤块，剔除其他组织后称重。若对照组小鼠肿瘤平均小于1g或20％小鼠的瘤重小于400mg，表示肿瘤生长不良。在治疗期间给药组小鼠死亡率大于20％或平均体重下降（自身对照）超过15％，表示药物有毒性反应，应适当减量重复实验。
比较实验组与对照组瘤重的差异，按下式计算肿瘤抑制率。
肿瘤抑制率＝（对照组瘤重－给药组瘤重）／对照组瘤重×100％
当经统计学处理抑瘤率＞30％，经统计学处理有显著性差异（P＜0．05）且经2次重复实验证明后，则评定该药对肿瘤有一定疗效。
瘤体的测量：一般认为实体肿瘤密度为1，即1mm的3次方肿瘤＝1mg肿瘤，故可采用测量瘤径计算体积的方法替代瘤重评价疗效。测量瘤体，不需要处死动物，因此可动态观察瘤体的变化。
每次测量计算得到每一单独肿瘤的体积后，计算相对肿痛体积RTV＝V／V0。其中V0为分笼给药时测量所得体积，V为每一次测量时的体积。就算相对肿瘤抑制率T／C×（％）。
相对肿瘤抑制率［T／C（％）］＝（治疗组RTV／阴性对照组RTV）×100％
当经统计学处理T／C（％）＞40％为无效；T／C（％）≤40％，并经统计学处理有显著性差异（P＜0．05＝且经2次重复实验证明后，则评定该药对肿瘤有一定疗效。
②肾包膜下移植模型
【实验方法】一般采用双侧肾包膜下移植，以降低实验误差，节省实验用的小鼠。具体步骤为：无菌条件下取得肿瘤块，立即选取活力好的组织，清除非肿瘤组织和坏死部分，生理氯化钠溶液漂洗，瘤块剪切成0．5mm的3次方左右的小块。动物腹腔麻醉后，依次用碘酊，乙醇消毒，左侧位纵切口，显露肾脏，将肿瘤组织接种到肾包膜下，在解剖显微镜下测量肿瘤太小（用长×宽表示），全层关腹。依次进行右侧肾包膜接种。术后继续饲养，自由进食，定时观察。术后第2天分笼给药，一般给药5－7次，每天1次，尽可能采用静脉或皮下给药方式，以避免腹腔内给药时药物直接弥散至移植瘤。手术后第9～11天处死动物，取出肾脏，用解剖显微镜在原位置测量肿瘤大小（用长×宽表示）。
【疗效评价】先计算出各组平均肿瘤增殖大小（Dn－D0），再按下列公式计算肿瘤生长抑制率。Dn为解剖时移植瘤的大小。D0为接种时移植瘤的大小，C为阴性对照组，T为治疗组，肿瘤生长抑制率≥50％判定为有效。
肿瘤生长抑制率＝（C（Dn－D0）－T（Dn－D0））／C（Dn－D0）×100％
③原位移植瘤模型：原位移植瘤模型具有以下优点：与宿主作用位点有相关性，治疗时有特殊位点依赖性，基因表达有器官依赖性，可以模拟临床恶性肿瘤的转移过程。原位移植瘤也存在一些同题，如操作困难，技术难度大，实验误差难控制。由于上述难点和缺陷，以及该模型发展时间短，迄今尚没有成熟的、统一的操作程序和评价标准。目前的评价主要以生存时间，转移情况为指标，结合原位移植瘤大小和其他生物学性状的改变等。原位移植瘤转移模型一般选用3周龄的裸小鼠，而不是通常的4周龄，原因在于3同龄的裸小鼠NK细胞水平低，有利于转移；也可以选用SCID或NOD／SCID等免疫缺陷严重的小鼠来提高转移率。
肝原位接种模型：无菌条件下处死荷瘤裸小鼠，分离移植瘤，选取活力好的瘤组织，并将瘤组织切成1mm的3次方小块。受瘤动物腹腔麻醉（4．35％的三氯水合氯醛）后，依次用碘酊，乙醇消毒，左上腹横切口，暴露肝脏。每只裸小鼠皆在肝左叶植入一瘤块，进针要深，固定于肝实质内，全层关腹。术后继续饲养，自由进食，定时观察。接种后2周左右开始分笼给药，给药时间3～4周。该模型也可采用细胞接种，接种量为0．2ml，1×10的6次方个细胞。操作要点：接种时，不可使肿瘤细胞扩散到腹腔内。已建立的模型举例：LCI－D20。
肠原位接种模型：动物腹腔麻醉（4．35％的三氯水合氯醛）后，依次用碘酊，乙醇消毒皮肤，在左侧胸腔剪一5mm的切口，分离脂肪和肌肉组织，暴露肋骨，即可看见左肺的移动。实验可采用细胞或组织块两种接种方式：收集对数生长期的细胞，在细胞悬液中加入基底胶，基底胶的作用是防止细胞液从肺脏中渗出，细胞培养液经注射器直接注入肺组织，深度为3mm；无菌条件下处死荷瘤裸小鼠，分离移植瘤，选取活力好的瘤组织，并将瘤组织切成1mm的3次方左右的小块，5块瘤组织用缝合线串在一起，通过第4肋间隙将肺组织移到切口外，用缝合线把5块瘤组织缝合在肺脏的下叶，然后将肺组织送回胸腔，缝合伤口。也可将小鼠固定，将肿瘤细胞直接由气管注入到肺内；或进行“T”字形气管切开术，将肿瘤细胞由支气管注射到肺部。肿瘤细胞量为0．02ml，2×10的4次方～3×10的4次方个。操作要点：接种完成后，要采用一定的措施将胸腔内恢复为负压状态，使肺脏恢复正常的生理状态。已建立的模型举例：Lu－24小细胞性肺癌。
肠原位接种模型：无菌条件下处死荷瘤裸小鼠，分离移植瘤，选取活力好的瘤组织，并将瘤组织切成1mm的3次方小块。动物腹腔麻醉（4．35％的三氯水合氯醛）后，依次用碘酊，乙醇消毒，在腹部中线做一切口，掏出结肠，在盲结肠的交接处去除接种点的浆膜，用缝合线把8～15块瘤组织缝合结肠处，将结肠送同腹腔，缝合伤口。也可将肿瘤细胞直接注射到皮肌层之间，细胞接种量为0．02ml，1×10的3次方细胞。操作要点：不可使肿瘤细胞或组织泄漏到腹腔内；接种位点位于盲肠上方约0．5cm的结肠处；如要求接种量一致，可采用细胞注射；评价方法主要是肝转移数量。已建立的模型举例：Co－3，SW－116等。
乳腺脂肪垫接种模型：收集体外对数生长期的细胞，接种细胞量一般为1×10的6次方～10×10的6次方个。用注射器将细胞注射到5－6周龄的雌性裸小鼠左侧第二个乳头的脂肪垫，注射量为0．1～0．2ml。如采用组织块接种，接种部位同为雌性裸小鼠左侧第2个乳头的脂肪垫，术后缝合。操作要点：接种时要正确注射到脂肪垫内；注射位点要靠近胸淋巴到管处，以便于形成肺内转移；多采用高转移细胞株或高转移、低分化的患者组织块，以提高成功率。已建立的模型举例：MDA－MB－231、MDA－MB－435等。
