放射配体受体结合（radioligand receptor binding assays，RAA）实验广泛用于测定受体的密度和亲和力
一、基本原理
药物与受体结合位点问的相互作用，遵守质量作用定律。利用不同浓度的放射性配基与一定量的受体结合，即可以用数学作图推导出受体含量，并计算出解离常数作为受体与配基亲和力的一个指标。
放射配基与受体制备物（含受体的组织或细胞制备物）作用时，其结合形式有两种，一种是配基与受体的特异性结合，其特点是亲和力高；且由于受体有限，故具有饱和性。另一种是配基与受体制备物的非受体分子的结合，称为非特异性结合。其特点是亲和力低但结合点多，不易饱和。用放射性配基研究特异性受体时，必须设法减除非特异性结合。一般采用的方法是制备总结合管和非特异结合管，两者计数之差即为特异性结合量。
（1）总结合管将放射性配基与受体制备物反应，除去游离的放射性配基，测定结合的放射性配基的计数，（其中包含特异性结合与非特异性结合，称为总结合）。
（2）非特异性结合管将大量（一般为500～1000倍）非标记特异性配基与标记的放射性配基相混，然后共同与受体制备物反应。由于非标记配基与标记配基两者比例悬殊，所以受体几乎全部被非标记配基饱和，标记配基只能与组织制备物中的非特异结合位点结合。这时测出的标记配基的结合量，反映的是非特异结合量。用总结合管的计数减去非特异结合管的计数，即可得到特异结合计数。
组织制备物中的受体含量及解离常数的计算：设想如果放射性配基浓度足够大，受体全部被其结合，这时的放射性配基的结合量即反映出受点含量，我们将其称为最大结合量，以B（max）表示。若以B代表与受体结合的配基量，F代表配基浓度，KD代表解离常数。
根据Clark受体理论：
B=B（max）·F／（F+KD）B与F作用是一条直角双曲线
将B=B（max）／（F+KD）变形得：
B／F=B（max）／KD－B／KD
以B／F与B作图，可得到一条直线，即scarchard作图。若放射性配基稀释成不同浓度（F），与受体制备物作用后，分别测得相应的结合配基量，即可绘出图，从而求得B（max）及KD。
以上是个配基一个受体的情况，若受体具有亲和力不同的两种以上的结合点，则Scatchard图是曲线。例如当有高低两种亲和力结合点时，scatchard图是双曲线。其两个渐近线分别代表高低亲和力两种结合点的图形，并可通过计算求出，从而求得相应的B（max）及KD。
现以大鼠吗啡受体亲和力测定为例讲解。
二、测定方法
1．实验前准备
试剂：
①纳洛酮：251nmol／L水溶液；
②3H依托啡：原液的放射比活性为44Ci／mmol，1mci／ml配成4．9nmol／L．按1：0．7的比例依次稀释，配制6个浓度的工作液，其浓度依次为：4．9nmol／L，3．43nmol／L，2．4nmol／L，1．68nmol／L，0．82nmol／L，0．4nmol／L
③甲苯闪烁液：PPO1．5g，POPOP300mg加甲苯至3000ml；
④50mmol／Tris—HCl buffer pH7．5。
2．操作步骤
（1）脑P2部分（吗啡受体粗膜）制备大鼠断头处死。取出全脑，弃去小脑，清除表面的脑膜及血管。称重后加10倍体积Tris—HCl溶液，用玻璃匀浆器研碎，制成10％匀浆。4℃，1000g离心10min，弃去沉淀。上清离心16000g，4℃20min，后保留沉淀。加50mmol／L Tris—HCl缓冲液混悬均匀，30℃保温30min，以去除内源性阿片样物质，再次离心16000g，4℃20min。保留沉淀并将其混悬于50mmol／LTris—HCl缓冲液中。使其蛋白浓度为16．7mg／ml，然后分装，置—20℃冰箱保存备用。此制备物即为阿片受体粗膜（P2）。
（2）RRA实验加样RRA实验加样，依表中所列顺序加入试管。P2制备物最后加，每个测定点都取双复管平行实验。每个配基浓度有4管，两个总结合管T（取平均值），两个非特异性结合管N（取平均值）；做6个浓度．共有24管，加样顺序见表5—4。
表5—4 RRA实验加样表
加样Tris—HCl纳洛酮3H—纳洛酮P2
总结会T 0．1ml—0．1ml 0．3ml
非特异结合管N—0．1ml 0．1ml 0．3ml
（3）分离与液闪测定加样完毕，样品试管混合均匀后，置于30℃室温下保温30min，冰上终止反应。过滤（滤膜用Tris液浸润，光面向上，毛面向下，5ml冷缓冲液，洗涤2次）。取下膜，滤膜放入闪烁杯，每管加8ml甲苯闪烁液，进行液闪测定。
