一、实验目的与要求
1.掌握组织培养中器官发生的途径。
2.掌握试管苗生根培养的方法。
二、实验原理
一个细胞所具有的产生一个完整植株的固有能力称做细胞的全能性。在组织培养中，只要条件适当，多数植物都能由体细胞组织分化出茎芽和根来。通过器官发生再生植株最普遍的方式是先分化芽，再分化根，最终形成再生植株。激动素/生长素的激素调控模式可以控制器官分化和生长方向。
三、实验材料、仪器、试剂
1.材料
葡萄、百合、大白菜等园艺植物试管苗。
2.仪器和用具
超净工作台、高压灭菌锅、酒精灯、培养皿、三角瓶（150mL冤、封口膜、酒精灯、镊子、解剖刀、量筒（100mL×3）、移液管（10mL×1，5mL×1，2.5mL×1，1mL×1）、洗球、玻璃棒、电炉、烧杯（500mL×3）、pH试纸。
3.试剂
（1）MS培养基大量元素母液（10倍）。
（2）MS培养基微量元素母液（100倍）。
（3）MS培养基有机母液（100倍）。
（4）MS培养基铁盐母液（200倍）。
（5）0.1mg/mLNAA母液：20mgNAA用少量95%酒精加热溶解后，用水定容至200mL。
（6）3%蔗糖：30g蔗糖溶于1000mL培养基中。
（7）0.6%琼脂：6g琼脂加热溶于1000mL培养基中。
（8）70%酒精：量取70mL100%酒精，加水定容至100mL。
（9）0.5%活性炭：5g活性炭溶于1000mL培养基中。
四、实验步骤
1.培养基的制备
（1）分别称取30g蔗糖和6g琼脂，加入蒸馏水在电炉上加热使之溶解。
（2）用移液管分别量取MS培养基大量元素母液100mL，MS培养基微量元素母液10mL，MS培养基有机母液10mL，MS培养基铁盐母液5mL，0.1mg/mLNAA母液1mL。
（3）与蔗糖、琼脂和活性炭混合后，加蒸馏水定容至1000mL，配制成MS＋NAA0.1mg/L固体培养基。
（4）混合均匀后，调整培养基的pＨ值到5.8。
（5）将培养基分装到三角瓶中，每个三角瓶约装40mL。
（6）用封口膜封严瓶口。
（7）将已装有培养基的三角瓶置于高压灭菌锅内，在121℃下灭菌20min。
（8）将灭菌后的培养基冷却至室温使其凝固。
2.接种
（1）超净工作台表面用70%酒精擦洗，再用紫外灯消毒30min。
（2）将解剖刀和镊子在70%酒精中浸泡5s～10s，并在酒精灯上反复灼烧。
（3）从培养瓶中取出不定芽丛，置于培养皿中用解剖刀进行分割。
（4）去处三角瓶封口膜，将瓶口在酒精灯火焰上旋转灼烧5s。
（5）将分割后的不定芽用镊子迅速转接至生根培养基上。
（6）将瓶口在酒精灯火焰上旋转灼烧5s，用封口膜封住三角瓶瓶口。
（7）在三角瓶上注明材料名称及接种时间，以便观察统计生根情况。
（8）接种完毕后，将三角瓶置于培养室中，温度24℃～25℃，光照16h，光照强度为160μmol·m-2·s-1条件下进行培养。
五、实验结果与分析
在离体培养中，培养材料发生器官能力大小差别很大，通过器官发生再生植株都要经过不定根的分化过程，有的是先分化芽，再分化根；有的是先分化根，再分化芽；还有在愈伤组织块的不同部位分化出根和芽，再通过维管组织的联系形成完整植株。生长素能够抑制不定芽的形成，其相对浓度较高则有利于细胞的增殖和根的分化。
【作业】
认真填写本项目实训报告单。
