一、热原
（一）概念及种类
热原是指微量即能引起恒温动物体温异常升高物质的总称，可分为外源性热原和内源性热原。外源性热原主要由病原体产生，如细菌、病毒、真菌、螺旋体、疟原虫等，在药品质量控制中热原主要是指细菌内毒素。内源性热原主要有白细胞介素—1（IL—1）、白细胞介素—6（1L—6）、肿瘤坏死因子（TNFa）和干扰素。
（二）作用机制
经过多年研究证明，热原进人人或动物体内循环系统后，刺激体内的免疫细胞，如淋巴细胞、单核细胞等释放细胞因于，即内源性热原，内源性致热因子直接或间接作用于体温调节中枢，引起体温调定点上升，中枢产生信息，作用于外周效应器，引起产热增加，散热减少，体温升高。
（二）临床危害
自1130多年前出现注射用药至今，非肠道所用医用制品中的热原对人体的危害即热原反应造成的危害最大，发生率最高；临床上主要表现为如下症状：发热，寒战，恶心，呕吐，头痛，腰及关节痛，肤色灰白，白细胞下降，血管通透性增强，严重者造成患者昏迷甚至休克、死亡。因此，热原检查是注射类型制剂及植人人体医疗器械的一项重要质量监控指标。
二、热原检查法
1912年有人提出家兔的热原实验，1923年seibert提出用家兔检测热原方法，1942年《美国药典》12版（USPⅫ）首先将家兔法作为药品的热原检查，以后一直作为法定热原检查法为各国药典所采用。《中国药典》1953年版开始收载。各国药典方法基本相同，本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。由于家兔对热原的反应与人基本相似，此方法只要剂量选用恰当，其结果基本上与临床反应相一致。
1．实验动物
选用同一来源、同一品系健康无伤家兔（供生物制品枪查用至少应为普通级动物），体重l．7kg以上（供生物制品检查用1．7—3．0kg），雌兔应无孕。预测体温前7天即应用同一饲料1兔1笼饲养，在此期间，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。
2．实验材料及器具
天平（供试品称量用精度0．01或0．1mg，试剂称量用精度0．1或1mg，家兔称重用精度10g）、电热干燥箱（器具灭菌及供试品溶液预热用）、恒温水浴箱（校准测温用具用）、漩涡混合器（配制混匀样品用）、热原测定仪或肛门体温计（精度0．1℃）、家兔固定盒（两侧有通气孔）、注射器、烧杯、三角瓶、称最瓶、吸管、移液管、取样器、广口瓶、直镊、金属制密封器、计时器、医用脱脂棉、75％乙醇、50％甘油、生理氯化钠溶液、灭菌注射用水、无热原氯化钠。
3．实验
（1）家兔预选未曾用于热原检查的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0 6℃的家兔；或3周内未曾使用的家兔（供生物制品检查用为未曾用于热原检查的家兔），均应在检查供试品前3～7天内预测体温，进行挑选。挑选实验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30min，测量体温1次，共测8次，8次体温均在38．0～39．6℃的范围内，且最高与最低体温相差不超过0．4℃的家兔，方可供热原检查用。用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48h方可再供热原检查用，其中升温达0．6℃的家兔除供生物制品检查外，可休息2周以上重复使用。如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。
（2）实验前家兔准备在热原检查前l～2天，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于3℃，并保持安静，避免强光照射，避免噪声干扰和引起动物骚动。家兔在实验前至少1h开始停止给食并固定于家兔固定盒中，直至检查完毕。测量家兔体温应使用精密度为±0 1℃的测温装置，测温仪或肛门温度计每3～6个月校验一次，不符合要求者不能使用。测温探头或肛门温度计经50％甘油润滑后插入家兔肛门，深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，操作中避免损伤家兔肠道。测温时间不得少于1．5min，间隔30min测温1次，一般测温2次，两次体温之差不超过0．2℃，以此两次测温的平均值作为该兔的止常体温，正常体温应在38．0～39．6℃的范围内，且同组选取的家兔正常体温之差不超过1℃。
（3）供试品准备检查用注射器、针头及所有与供试品接触的实验用器皿应无菌、无热原。去除热原通常采用下热灭菌法（250℃加热30以上），也可用其他适宜的方法。
供试品剂量，应按照该药项下规定注射（生物制品检查规定家兔每1kg体重注射体积≥0．5ml且≤10ml），未规定剂量的药品，可根据该药药理性质，在不影响家兔正常生理前提下，按体重计算（人按50kg），用量为临床一次剂量的3～10倍。
原料药精密称取适量，置于烧杯、三角瓶或称量瓶中，按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水或生理氯化钠溶液，使溶解混匀。粉针剂用75％乙醇消毒安瓿颈部或小瓶瓶塞，加入一定量规定的溶剂配成所需浓度。注射液用75％乙醇消毒安瓿颈部，割开安瓿，精密量取一定量药液，加精密量取的一定量灭菌注射用水或生理氯化钠溶液至所需浓度混匀。
（4）检查法供试品或稀释供试品在注射前应预热至38℃，取适用的家兔3只，测定其正常体温后15min内，自耳静脉缓缓注入规定剂量，然后每隔30min测温1次，连续测温6次，以6次中最高体温减去正常体温，即为该兔体温的升高温度。如3只家兔中1只体温升高≥0 6℃，或同纽3只家兔体温升高总和≥1．4℃（《中国药典》二部中收录的药品及辅料为≥1．3℃），应另取5只家兔复试，检查方法同上。
4．结果判定
初试3只家兔中，体温升高均低于0．6℃，且3只家兔体温升高总和低于1．4℃（《中国药典》二部中收录的药品及辅料为低于1．3℃）；或在复试的5只家兔中，体温升高≥0．6℃的家兔不超过1只，且初、复试合并8只家兔体温升高总和≤3．5℃．均判定为供试品的热原检查符合规定。
在初试的3只家兔中，体温升高≥O．6℃的家兔超过1只；或在复试的5贝家兔中，体温升高≥0．6℃的家兔超过1只；或在初、复试合并8只家兔的体温升高总和超过3．5℃，均判定供试品的热原检查不符合规定。
家兔体温升高为负值时，均以0℃计。
