②悬吊法：采用背部悬吊（将吊板粘于背部），躯干悬吊和尾部悬吊等方法，将动物置于头低位，双后肢悬空，两前肢载重并可在一定范围内活动，与太空飞行时处于失重状态相似。
③坐骨神经切除法：将8月龄大鼠坐骨神经切断，相应肢体被制动。8周后出现尿羟脯氨酸含量升高，胫骨抗弯力下降，骨小梁体积、小梁厚度显著降低，股矿质丢失，形成骨质疏松。
（3）评价手术切除动物一侧膝腱和跟腱也能成功复制废用性骨质疏松模型。废用性骨质疏松动物模型对防治瘫痪、骨折、术后长期卧床的患者及航空人员出现的骨质疏松有重要意义。
（三）各类指标的观察和测定
造成骨质疏松的原因不同，模型也不同，但评价骨质疏松的指标是基本相同的。
1．骨物理量指标测定法
骨物理量测定包括骨湿重、干重、灰重、体积、长度等的变化。
骨质疏松的模型动物处死后取出股骨、胫骨，去掉附着的肌肉及结缔组织，测量湿重、长度与直径；用玻璃容器法将骨浸入量器中，测得骨标本的体积V；随后以2份三氯甲烷＋1份甲醇混合液脱脂72h。置烘箱中120℃烘6h至恒重，冷却后称量得干重；再将干骨置800℃马福炉内灰化6h，冷却后称取灰重。
2．骨生物力学指标测定和骨矿物成分的测定
（1）大鼠股骨生物力学测定大鼠处死，取左侧股骨，剔除肌肉和筋膜，用生理氧化钠溶液纱布、锡纸包裹，放入－20℃冰箱保存。测试时，将－20℃保存的股骨常温解冻，用858Mini Bionix型材料测试系统对股骨干进行三点弯曲实验。将大鼠左侧股骨置于MTS实验机上，用1mm直径的压头，加载速度为0．01mm／s，跨距（L）为15mm，在股骨正中间施加压力载荷至断裂，测试系统自动记录载荷－变形曲线，根据曲线即可得到最大载荷、断裂载荷、弹性载荷、弹性桡度、弯曲能量等。骨生物力学是对骨质量进行直接评价，即将物理学及应用数学的概念和方法用到生物体中，评价生命现象。
（2）骨矿物成分的测定取实验大鼠股骨（或胫骨）置于120℃烘箱中烘烤12h后，用1／10万电子天平称干重，再置于600～650℃马福炉中灰化6～8h，使骨呈白色粉末状，用1／10万电子天平称灰重，其灰重即为无机质重量。用原子吸收仪测定或用离子选择电极法及钼蓝比色法测出骨灰中钙、磷等元素含量。
3．骨密度测量
骨密度测试，是利用仪器在体外对动物骨骼中的矿物质含量，主要是骨骼中的羟磷灰石［Ca（下标10）（PO（下标4））（下标6）OH（下标2）］的台量，进行测定和定量分析的一种方法。骨密度是判断骨质量的依据，是分析骨代谢变化的重要内容，精确定量测定骨密度能判断骨量水平，了解骨吸收与骨形成功能状态，是研究骨质疏松和评价药效的重要检测手段。
常用的测量手段包括：单光子吸收测定法、双光子吸收测定法、定量CT法和双能X线吸收测定法等。
（1）单光子吸收测定法（SPA）利用骨组织对放射线的吸收与骨矿含量成正比的原理，以放射性同位素为光源，测定人体四肢骨的骨矿含量。一般常用部位为桡骨和尺骨中远1／3交界处，可测定骨矿含量（BMC，g／m），骨横径（BW，cm）骨密度（BMD，g／c㎡）及骨矿分布曲线。该法不能测定髋骨及中轴骨的骨宽度。
（2）双能X线吸收测定法（DEXA）通过X射线束滤过式脉冲开头技术可获两种能量，即低能和高能光子峰。射线穿透身体之后，扫描系统将接受的信号传送到计算机进行数据处理，计算骨矿物质含量（BMC）、面积（AREA）、骨密度（BMD）。该仪器可测定全身任何部位的骨量，精确度可达到0．62％～1．3％。此法较准确，重复性好，对机体危害较小。
（3）定量CT法（QCT）可以选择性地评价皮质骨和松质骨骨量，但准确度及重复性稍差。
（4）超声波法（USA）可测定骨密度和骨强度。与双能X线吸收测定法相关性良好，该法操作简便、安全无害，价格便宜，值得推广。
方法：
①股骨骨密度测定：处死动物，取一侧股骨剔除肌肉和筋膜，用生理氯化钠溶液纱布、锡纸包裹，放入－20℃冰箱保存。测试时将股骨置于有蒸馏水的有机玻璃盒支架上固定，以全长的1／2交界处为测量点，应用SPA单光子密度仪做骨横越扫描。
②全身骨密度测定：将麻醉动物置骨密度仪探头下，应用动物全身骨密度测定软件全身扫描。
4．骨组织形态学指标测量
骨组织形态学观察是把从动物取得的骨活检标本用组织形态学方法观察并测量各种不同的参数，以分析研究骨质疏松的病理变化和动力学特征，探讨骨质疏松的发展过程。骨组织形态学分析包括骨标本的骨片静态和动态分析测量。
（1）静态组织学参数
①骨小梁骨样组织体积：松质骨空间体积内所含骨样组织的体积百分数，是衡量骨量水平的主要指标；
②骨小梁成骨细胞表面：骨样组织表面覆盖着成骨细胞表面占骨小梁表面的百分数；
③骨小梁破骨细胞吸收表面：破骨细胞正在吸收及吸收完成破骨细胞已经消失而成骨细胞尚未出现的表面占骨小梁总体积的百分数。
（2）动态组织形态学指标
①骨小梁四环素双标表面：四环素双标荧光表面长占骨小梁表面总长的百分数；
②骨小梁四环素单标表面：四环素单标荧光表面长占骨小梁表面总长的百分数；
③矿化率：四环素双标线之间的平均距离除以两次标记之间相隔天数。
（3）骨标本制作一般分为脱钙骨切片、骨磨片和不脱钙骨切片三种。脱钙骨的缺点是不了解骨的矿化过程；磨片法费时，骨标本又易破碎；通过不脱钙骨切片可了解骨的动力学过程。
骨质疏松动物模型处死前用四环素进行标记40mg／（kg·d）。第一次在处死前第9天给药，第二次在处死前第3天给药。四环素标记后将动物麻醉，无菌条件下取出一侧股骨下端近关节段，将周围软组织剔除干净，立即放入40％乙醇中固定，置于4℃冰箱。标本采取后将动物处死。
不脱钙骨切片的制作：
①固定：标本采取后立即固定于40％乙醇中，保存于4℃冰箱中，固定24h；
②脱水：固定后以40％，70％，80％，95％，100％乙醇系列脱水各2次，24h／次；
③透明：于二甲苯中透明24h；
④渗透：将透明过的标本依次入MMAⅠ液、MMAⅡ液、MMAⅢ液进行渗透，48h／次；
⑤包埋：在适中的包埋器在中，将骨标本浸于新鲜配置的包埋液中，置包埋器于40℃恒温箱中12h，然后置于室温下直至包埋液硬化，放于4℃冰箱内保存；
⑥切片：修整包埋标本块用重型切片机切片。切片时用40％乙醇湿润刀面及组织切面。切制5～7μm切片以观察细胞结构，15～20μm于荧光下测量四环素标记的数据。将载玻片于50℃的贴片液中浸数分钟，然后于50℃恒温箱中烘干。在处理过的载玻片上滴数滴95％乙醇，放上切片，用跟科镊小心展开，覆以一张薄纸，压紧切片，用夹子夹紧放置于37℃恒温箱中烘干；
⑦染色：切片依次入MMAⅠ液、Ⅱ液进行脱塑，各10min。下行乙醇：依次入无水乙醇，95％乙醇，90％乙醇，80％乙醇，70％乙醇，每级2min。蒸馏水浸洗数分钟，甲苯胺蓝液中染色30min，缓冲液中冲洗2次，1min／次。用滤纸洗干切片，入无水乙醇脱水2次，1min／次。二甲苯透明2次，1min／次。切片晾干后用贴片液封固。染色结果：矿化骨组织呈深蓝至深紫色，类骨质呈浅蓝色，矿化前缘呈深紫色，黏合线呈浅蓝色，破骨细胞呈浅蓝色，软骨基质呈异染紫色。
5．骨代谢生化指标
骨组织的代谢是一个旧骨不断被吸收，新骨不断形成，周而复始的循环过程，此称为骨的再建。骨再建的速率称为骨更新率或转换率。测定模型动物血、尿的矿物质及某些生化指标有助于判断骨代谢状态及骨更新率的快慢，对骨质疏松症的研究有重要意义。
（1）骨形成指标
①碱性磷酸酶（ALP）和骨特异性碱性磷酸酶（B－ALP）是反映成骨细胞活性和骨形成的特异及敏感指标。Gomesz等建立的高特异性单克隆抗体免疫分析法具有很高的敏感性和特异性，被认为是目前定量测定B－ALP的最佳方法。
②骨钙素（BGP）是骨骼中含量最高的非胶原蛋白，通过BGP的测定可以了解成骨细胞的动态，是骨更新的敏感指标。血清BGP可作为评估骨转换率及骨形成的灵敏和特异性指标，目前对于血清骨钙索的检测方法常用放射免疫法。也有学者使用电化学发光免疫法测定血清骨钙素N－MID片断，稳定性及灵敏度好，能更好地反映骨转换的变化。
③血清Ⅰ型前胶后羧基端前肽（PICP）是成骨细胞合成胶原时的中间产物，是反映成骨细胞活动状态的敏感指标，与骨形成呈正相关。目前临床上可以采用RIA（放射免疫法）和ELISA（酶联免疫吸附法）测定其含量。
④护骨素（OPG／RANKL／RANK）系统：OPG能够显著的抑制破骨细胞的活性，并且增强骨强度。OPG／RANKL／RANK是近年来发现的在破骨细胞分化过程中的一个重要信号传导通路，它的发现是阐明骨质疏松症的细胞机制及其他疾病的内在联系的一个重要的里程碑，并且为研究骨质疏松药物治疗开辟了新的途径。
⑤基质金属蛋白酶（MMPs）是锌离子依赖性酶组成的蛋白分解酶家族，在骨基质降解中发挥重要作用。由成骨细胞分泌的MMP－1，MMP－2在骨重建过程中通过降解骨基质启动骨吸收与骨形成，是反映骨吸收与骨形成互相调节的耦联因子。
（2）骨吸收指标
①羟脯氨酸（HOP）：是人体胶原蛋白的主要成分，为非必需氨基酸，是多种胶原的降解产物。反映骨更新的指标，受饮食影响较大。长期以来人们采用氯胺T氧化法测量HOP作为骨吸收标志物，该法试剂便宜，结果稳定。
②羟赖氨酸糖苷（GHyl）：用GHyl单克隆抗体建立的测定方法是反映骨吸收较特异和灵敏的指标。GHyl是惟一的胶原组织才含有的氨基酸，一旦从胶原中分解出来，就不能再被机体利用，且不受饮食干扰，故为胶原降解较好的标志物。
③抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）：TRACP是6种酸性磷酸酶同工酶之一，即第5型，主要由破骨细胞释放，检测血清中TRACP的水平可以反映体内破骨细胞活性和骨吸收状态。
④吡啶啉和脱氧吡啶啉（PYD，DPD）：PYD和DPD是胶原纤维之间的连接物，使胶原纤维共价交联稳定相聚合，PYD主要存在于骨和软骨中，DPD更局限，只存在骨组织中，且DPD变成降解产物被释放入血，交联物在血中不被降解，不被肝脏代谢，不受饮食影响，骨组织特异性高，被认为是目前临床最好的评价骨吸收指标。最初用离子交换层析技术及高效液相色谱法，现在多用酶联免疫吸附方法测定。
⑤Ⅰ型胶原N末端肽（NTX）和Ⅰ型胶原C端肽（CTx）：反映骨吸收和骨转移的指标，较HOP更为特异和灵敏，方法简便、快速。NTX是含有PYD和DPD的低分子量肽，是Ⅰ型胶原交联末端肽，为总的N端交联物，是骨降解后尿中出现的一种稳定最终产物。测定NTX、CTX有放免法（RIA）及酶联免疫吸附法（ELISA），目前商品的试剂盒多采用ELISA。
血、尿骨矿成分的检测：血清总钙，血清无机磷，血清镁，尿钙、磷、镁的测定。
