一、目的及要求
1.要求了解培养基内所含的各种营养成分。
2.掌握配制培养基贮备液的方法。
3.区分不同激素尤其是细胞分裂素的常用溶剂。
二、原理
培养基是植物组织培养中离体植物材料赖以生存的“土壤”。不同组织培养类型、外植体需要的培养基配方不同。组织培养是否成功，培养基的选择具有重要作用。目前常用的培养基配方有MS、B5、White、N6、HE等。一般快速繁殖常使用MS培养基，花粉单倍体培养常用培养基B5，不论何种培养基，都由矿物营养、维生素、碳源、植物激素、有机附加物等五类物质组成。在植物组织培养中，应根据培养植物的种类和部位，选择最适宜的培养基，才能获得植物组织培养的成功。
在完善的培养基配方中，至少应包括：无机营养元素，如氮、磷、钾、钙、镁、硫，以及来源于水中的氢、氧元素等，以上几种元素植物组织需要量较多，称为大量元素。另一些需要量少的称为微量元素，如硼、锰、锌、钼、铜、钴等。植物组织还不可缺乏微量元素铁，由于铁在配制中易引起沉淀，因而单独与一种螯合剂配制成铁盐溶液。植物组织在离体之后，难以依靠光合作用维持其生存，它所需要的碳素，是以各种糖的形式提供于培养基中，糖不但起着碳源的作用，也是提供能量的来源，还起着维持渗透压的作用。植物组织还需要一些维生素、氨基酸、肌醇等有机成分。为了调节控制植物组织的生长与分化、形态发生及适当的生理过程，还经常使用植物激素。
三、仪器及试剂
1.仪器和用具
（1）分析天平（万分之一、千分之一）；
（2）恒温水浴锅（501A）；
（3）电炉；
（4）磁力搅拌器（781型）；
（5）量筒（1000mL、100mL、50mL、25mL）；
（6）移液管（50mL、25mL、10mL、5mL、2mL、0.5mL、0.1mL）3套；
（7）1000mL瓷缸若干个；
（8）烧杯（1000mL、500mL、250mL、200mL、100mL）3套；
（9）容量瓶（1000mL、500mL、100mL、50mL）3套；
（10）试剂瓶（棕）（1000mL、500mL、200mL、100mL、50mL）各6个。
2.试剂
（1）MS培养基贮备液。
（2）植物激素：2，4-D、IAA、IBA、NAA、KT、BA、ZT、三十烷醇。
四、实验步骤
1.可先将MS培养基贮备液配成20倍或200倍的浓缩贮备液：①贮备液I（浓缩20倍）；②贮备液II（浓缩200倍）；③贮备液III（浓缩200倍）；④贮备液IV，除了蔗糖之外的有机物质（浓缩200倍）。各个贮备液放入冰箱内保存，用时可按比例稀释。现以配制MS培养基为例加以说明。配制贮备液一般用重蒸馏水或蒸馏水。
2.贮备液I为大量元素母液，配成10倍液，用感量0.01g天平称取，分别溶解后顺次逐个加入并混合，加水定容至500mL。注意添加顺序，否则易发生沉淀。
3.贮备液II为微量元素母液，配成100倍液，用感量0.0001天平称取，分别溶解，依次加入混合，加水定容至1000mL。
4.贮备液III为铁盐母液，按照表中的浓度将FeSO4·7H2O和Na2·EDTA·2H2O分别放大100倍，配成100倍液，加水定容至1000mL，置于棕色瓶中，用力振荡1min～2min，避光保存。
5.贮备液IV为维生素、氨基酸母液，可配成200倍液，用感量0.0001的天平称取，分别溶解，混合后加水定容至500mL。
6.植物激素的配制：植物激素配制的一般浓度为0.1mg/mL～1mg/mL。
（1）IAA：用少量95%的酒精溶解后加水至一定浓度。
（2）NAA：用少量95%的酒精或热水溶解，再定容至一定体积。
（3）IBA：用50%的酒精溶解后定容，高浓度时加水过多会发生沉淀。
（4）2，4-D：用1mg/mL氢氧化钠溶解后，加水定容（1mg/mL氢氧化钠配制，称4g氢氧化钠溶于100mL容量瓶中，加水定容至100mL）。
（5）KT和BA：先溶于1mg/mL盐酸中，再加水定容（1mg/mL盐酸配制，取比重为1.19的盐酸84mL加到1000mL）。
（6）ZT：先用少量95%的酒精溶解，再加水定容。
配制好的母液应分别贴上标签，注明母液号码、配制倍数、日期以及配制1L培养基时应取的量，母液最好在2℃～4℃或-20℃的冰箱中贮存，特别是对激素与有机类物质要求较严，贮存时间不宜过长，在使用这些母液之前必须轻轻摇动瓶子，如果发现其中有沉淀悬浮物或微生物污染，必须立即将其倒掉，重新配置。
若激素或有机物很长时间未用，但也出现沉淀，应重新配置，尤其是一些难生根的经济木本植物或者种苗工厂化生产。
大量元素母液可不必放入冰箱保存，大量元素有些化合物较难溶解，如KNO3，溶解时需加热，它的溶解度与温度密切相关，如果放入冰箱，冰箱内温度相对较低，不利于KNO3的完全电离，直接影响母液中NO的含量，所以不主张将大量元素母液必须放入冰箱。
【作业】
1.离体植物吸收氮离子形式有哪几种？配制MS培养基大量元素母液应注意什么？
2.认真填写本项目实训报告单。
