一、外植体接种
1.取材
取材时间：早晨9：00～10：30。
取材部位：选当年生生长旺盛、健壮、无病虫害的优良单株，取新梢的幼嫩茎段。
2.材料处理
清洗：将材料剪成8cm～10cm的枝条，用自来水冲洗30min，用饱和洗衣粉溶液刷洗，再用清水冲洗30min。
消毒：在超净工作台上，将材料剪成3cm～4cm，放入广口瓶，用70%酒精消毒30s～50s，0.1%氯化汞溶液消毒3min～5min，用无菌水清洗5遍～6遍。
接种：在超净工作台上，将材料剪成1个～2个芽的茎段并修剪茎段两端，接种于诱导芽培养基中，每瓶接3株。
诱导芽培养基：
互叶醉鱼草：MS+6-BA0.3mg/L+IAA0.6mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%
红花醉鱼草：MS+6-BA0.8mg/L+IAA1.0mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%
二、芽诱导及继代增殖培养
1.继代培养周期：25d。
2.芽增殖倍数：3倍～6倍。
3.生长标准：株高2cm～3cm，2个～3个芽。
4.增殖方式：丛生芽。
5.继代增殖培养基：
互叶醉鱼草：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%
红花醉鱼草：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%
6.培养室环控条件：
温度：22℃～25℃；光照强度：200μmol·m-2·s-1～240μmol·m-2·s-1，光照时间：
12h/d。每周喷药2次。
三、试管生根苗培养
1.试管苗标准：选择试管苗株高2cm～3cm，有3片～4片叶的苗转入生根培养基中。
2.生根苗环控条件：温度25℃～28℃，光照强度200μmol·m-2·s-1～240μmol·m-2·s-1，光照时间12h/d。
3.生根培养基：
互叶醉鱼草：1/2MS+IBA0.3mg/L+IAA0.6mg/L+蔗糖1.5%+琼脂0.6%
红花醉鱼草：1/2MS+IBA0.5mg/L+NAA0.3mg/L+蔗糖1.5%+琼脂0.6%
4.试管生根苗移栽标准：试管苗健壮，株高3cm～4cm，根长0.1cm～0.5cm，4片～5片叶，根数3条～5条（互叶醉鱼草1条～2条）。
四、试管生根苗移栽
1.炼苗
当试管苗70%生根转移到温室即可炼苗。温度为20℃～22℃，光照强度400μmol·m-2·s-1～560μmol·m-2·s-1，时间7d～10d，试管苗移栽前3d敞口炼苗，炼苗期间要定期喷药，注意防病防虫。
2.试管苗移栽
当诱导生根苗高3.0cm以上，有3条以上长0.5cm左右的根时，可出瓶移栽。
移栽前将根部培养基清洗干净，根部用800倍代森锰锌溶液浸泡1min～2min，未生根苗根部速蘸50ppm吲哚丁酸。
穴盘：选择128穴盘，清洗干净后用0.2%高锰酸钾溶液浸泡10min后捞出晾干备用。将混配好的基质装入穴盘中放入炼苗地点，移栽前1d对基质浇透水，移栽时用50%多菌灵800倍溶液喷洒消毒。
基质配比：草炭∶蛭石∶珍珠岩=5∶3∶2
环控要求：环境控制条件：移栽8d～10d内10：00～16：00遮阳，每15min喷雾1次，每次喷雾3s～5s，温度22℃～25℃，湿度80%～85%。8d～10d后有60%～70%生根，10：00～16：00每40min喷雾1次，每次8s，温度20℃～22℃，湿度50%～60%。
日常管护：移栽15d后每天中午喷雾1次，每次6s，20d后取消喷雾，喷施0.1%磷酸二氢钾，10d1次。
【思考题】
1.花灌木组织培养中各阶段培养基的设计原则是什么？
2.木本植物常用外植体取材部位是什么？诱导方式是什么？
