酶组织化学技术在研究血涂片和其他一些淋巴造血组织标本方面有着很重要的作用。它对组织标本处理有一定要求，血涂片一般需在空气中自然干燥，标本通常不能用甲醇固定。淋巴结和脾脏标本多采用中性缓冲福尔马林固定或直接做冰冻切片。
一、萘酚As－D氟醋酸酯酶（Leder氏染色法）
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片石蜡，6微米，空气干燥血涂片或印片。
3．试剂
4％副品红贮存液
盐酸副品红1克
蒸馏水20毫升
浓盐酸5毫升
微加热混匀，冷却，过滤，冰箱内贮存。
4％亚硝酸钠贮存液
亚硝酸钠4克
蒸馏水100毫升
冰箱内存放，一般约可存放1周。
亚硝酸钠副品红工作液
4％副品红贮存液 2滴
4％亚硝酸钠贮存液 2滴
用时现配，配好后静置1分钟。
Michaelis佛罗那醋酸缓冲贮存液
醋酸钠 9．7克
巴比妥钠 14．7克
蒸馏水 500毫升
冰箱内贮存。
1摩尔盐酸
盐酸 85毫升
蒸馏水 1000毫升
0．1摩尔盐酸
1摩尔盐酸10毫升
蒸馏水90毫升
Michaelis佛罗那醋酸缓冲工作液
Michaelis佛罗那醋酸缓冲贮存液45毫升
0．1摩尔盐酸 35毫升
副品红—佛罗那醋酸液
亚硝酸钠副品红工作液4滴
Michaelis佛罗那醋酸缓冲工作液60毫升
酯酶底物液
萘酚As－D氯醋酸20毫升
N，N－二甲基甲酰胺 2毫升
用时现配。
副品红—佛罗那醋酸酯酶液
副品红—佛罗那醋酸液PH6．3 60毫升
酯酶底物液2毫升
混匀，用高标性滤纸过滤。
4．步骤
（1）将已脱蜡水化的切片或血涂片、印片置入已滤好的副品红—佛罗那醋酸酯酶液中30～120分钟，每15～30分钟显微镜下观察一次，检查有无反应酶活性的棕红色出现；
（2）用蒸馏水彻底洗3分钟；
（3）Mayer氏苏木素溶液复染2～5分钟；
（4）蒸馏水漂洗；
（5）用甘油明胶封固。
5．结果
中性粒细胞细胞猩红色
组织肥大细胞猩红色
Chediak－Higashi包含体 猩红色
核仁蓝色
二、醋酸α－萘酯酶
1．固定10％中性缓冲福尔马林。
2．切片冰冻或石蜡，4～6微米，血涂片和印片。
3．试剂4％副品红贮存液
盐酸副品红1克
蒸馏水20毫升
浓盐酸 5毫升
微加热、混匀、冷却、过滤、存放于冰箱。
4％亚硝酸钠贮存液
亚硝酸钠 4克
蒸馏水 100毫升
冰箱存放可保存1周。
Tris缓冲液，pH7．0
亚硝钠／副品红液
4％亚硝酸钠贮存液 2滴
4％副品红贮存液 2滴
用前混合，然后加入
Tris缓冲液，pH7．650毫升
充分混匀。
酯酶底物液
a－萘醋酸 0．02克
乙二醇乙醚 2毫升
用时现配。
酯酶底物—亚硝酸钠副品红工作液
亚硝酸钠副品红液 50毫升
酯酶底物液 2毫升
Mayer氏苏木素溶液
4．步骤
（1）将已脱蜡水化的切片或血涂片、印片置入酯酶底物／亚硝酸钠副品红工作液中，室温下1～2小时，每15～30分钟显微镜下观察一次，直到棕红色出现；
（2）用蒸馏水彻底洗3分钟；
（3）Mayer氏苏木素溶液复染2～5分钟；
（4）蒸馏水漂洗；
（5）用甘油明胶封片。
5．结果
T细胞、中性粒细胞、单核
细胞、组织细胞等之胞浆棕红色
三、丁酸α－萘酯酶
1．固定空气干燥血涂片或印片，10％中性缓冲福尔马林液。
2．切片冰冻和石蜡，4～8微米，血涂片或印片。
3．试剂
4％副品红贮存液
盐酸副品红 1克
蒸馏水 20毫升
浓盐酸 5毫升
微加热，混匀，冷却，过滤，冰箱贮存。
4％亚硝酸钠贮存液
亚硝酸钠 4克
蒸馏水 100毫升
冰箱可保存1周
副品红工作液
4％副品红贮存液 1．5毫升
4％亚硝酸钠贮存液1．5毫升
混匀，静置5分钟。
Tris缓冲液pH7．6（用前预热至37℃）
底物工作液
Tris缓冲液，pH7．6 40毫升
α－萘丁酸0．02克
乙二醇乙醚 2毫升
使用前混匀。
Mayer氏苏木素溶液
4．步骤
（1）将已脱蜡至蒸馏水的切片、血涂片或印片置入酶底物工作液中，室温下每15分钟在显微镜下观察一次，直到红色出现，通常需要30～60分钟；
（2）蒸馏水冲洗2～3分钟，空气中干燥15分钟；
（3）Mayer氏苏木素溶液复染2～5分钟，蒸馏水冲洗，用甘油明胶封片。
5．结果
单核细胞和组织细胞胞浆棕红色
T细胞Golgi区 棕红色
中性粒细胞和嗜酸性细胞无色
四、Burstore氏碱性磷酸酶染色法
1．固定新鲜冰冻组织，10％中性缓冲福尔马林。
2．切片冰冻或石蜡，4～8微米，涂片或印片。
3．试剂
萘酚As－Mx磷酸—二甲基甲酰胺（DMF）溶液
萘酚As－MX磷酸4克
N，N－二甲基甲酰胺（DMF） 0．25毫升
混匀，至完全溶解。
Tris缓冲液，pH8．6
底物工作液
萘酚As－MX磷酸—DMF溶液 0．25毫升
蒸馏水25毫升
Tris缓冲液pH8．6 25毫升
振摇至充分混匀，再加入
重氮盐（紫红LB盐） 30克
充分混匀后过滤，滤液盛于染缸内，应为清亮淡黄色。
Mayer氏苏木素溶液
4．步骤
（1）冰冻切片或脱蜡至水的石蜡切片置于底物工作液中5～30分钟，每5～10分钟检查一次，至出现红色反应物止；
（2）蒸馏水漂洗；
（3）苏木素复染2～5分钟（此步如不需要，可省略）；
（4）蒸馏水漂洗；
（5）甘油明胶封固。
5．结果
中性粒细胞，B淋巴细胞红色
五、Barka酸性磷酸酶染色法
1．固定10％中性缓冲福尔马林或甲醛钙溶液。
2．切片冰冻，4～6微米，空气干燥血涂片或印片。
3．试剂
4％副品红贮存液
盐酸副品红 1克
蒸馏水 20毫升
浓盐酸 5毫升
微加热，混匀。冷却，过滤，冰箱贮存。
4％亚硝酸钠贮存液
亚硝酸钠 4克
蒸馏水 100毫升
冰箱可保存1周。
Mtchaelts佛罗那醋酸缓冲贮存液
醋酸钠 9．7克
巴比妥钠 14．7克
蒸馏水 500毫升
底物工作液
溶液A
a－萘酚磷酸钠 20毫克
蒸馏水 13毫升
MlchaelIs佛罗那醋酸缓冲贮存液 5毫升
溶液B
在试管内把下列试剂混合：
4％副品红贮存液 0．8毫升
4％亚硝酸钠贮存液 0．8毫升
混匀，静置2分钟。
将A液与B液混合，用1摩尔氢氧化钠调pH值至6．5，过滤。
1摩尔氢氧化钠
氢氧化钠 40克
蒸馏水 100毫升
Mayer氏苏木素溶液
4．步骤
（1）将空气干燥的冰冻切片或血涂片置于底物工作液中，室温下10～30分钟；
（2）蒸馏水洗2次；
（3）Mayer氏苏木素溶液复染2～5分钟；
（4）蒸馏水冲洗；
（5）甘油明胶封片。
5．结果
酶活性部位出现棕红色沉淀物。
在T细胞Golgi区为阳性，肥大细胞为弱阳性。
六、髓过氧化物酶染色法
1．固定组织用10％中性缓冲福尔马林液固定，涂片用甲醇固定，血涂片在甲醇液中固定30秒，蒸馏水浸洗之后，避风干燥10分钟。
2．切片石蜡，6微米，血涂片。
3．试剂
3％过氧化氢液
Tris缓冲液，pH6．3
过氧化酶显示剂溶液
p－苯二胺 25毫克
儿茶酚 50毫克
Tris缓冲液，pH6．350毫升
预热到37℃5分钟，加入0．2毫升3％过氧化氢液。
1％碘化钠液
碘化钠1克
蒸馏水100毫升
酸化苏木素液
苏木素50毫克
蒸馏水48毫升
1％碘化钠液1毫升
加热煮沸，冷却后加入
冰醋酸2毫升
4．步骤
（1）血涂片或脱蜡水化后的石蜡切片置入已预热至37℃的过氧化酶显示剂溶液中孵化约30分钟；
（2）蒸馏水浸洗15～30秒钟；
（3）空气干燥15分钟；
（4）酸化苏木素液复染10分钟；
（5）蒸馏水洗15～30秒钟；
（6）空气干燥至少15分钟，二甲苯浸泡；
（7）树脂封固。
5．结果
中性粒细胞（包括幼稚中性粒细胞） 棕黑色
