手术中快速活检组织病理学检查（简称快速活检）是临床医师在实施手术过程中为明确病理诊断，以决定进一步手术方案而请求病理医师快速进行的紧急会诊。快速活检要求病理医师在很短的时间内（30分钟左右）对切除标本进行巨检、组织快速冷冻切片（或快速石蜡切片），最后向手术医师提供参考性病理诊断，诊断结果直接影响临床诊断。因快速活检具有较大的局限性和误诊的可能性，而且有的需要等常规石蜡切片进一步明确诊断，难以快速诊断，因此，对于只是外科医师急于知道诊断结果，对手术影响不大的病例，应尽量减少快速活检。
（一）适用范围
决定病变的性质（如确定肿瘤或非肿瘤，良性肿瘤或恶性肿瘤等），以决定手术方案的标本。
确定切除肿瘤的边缘是否有残留的肿瘤组织。
确定切除的组织。如甲状旁腺、输卵管、输精管、异位组织及先天性巨结肠的神经节细胞减少或缺如等。
了解恶性肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织、有无区域淋巴结转移等。
（二）慎用范围
涉及截肢和其他会严重致残的根治性手术切除的标本。需要此类手术治疗的患者，其病变性质宜于手术前通过常规活检确定。
（三）不宜应用的范围
疑为恶性淋巴瘤。
过小的标本（送检长径≤0.2cm 者）。
术前易于进行常规活检者。
脂肪组织、骨组织和钙化组织。
需要依据核分裂像计数判断良、恶性的软组织肿瘤。
需要依据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、恶性的肿瘤。
已知具有传染性的标本（例如结核病、病毒性肝炎、艾滋病等）。
二、标本的接收与检查
临床医师应于手术前向患者和（或）患者授权人说明快速活检的意义及局限性等，取得患者和（或）患者授权人的知情和理解。患者和（或）患者授权人应在由医院制定的“手术中快速活检患方知情同意书”上签署意见和签名。
主持手术的临床医师应在手术前一天向病理科递交快速活检申请单，填写患者的病史、重要的影像学、实验室检查结果和提请病理医师特别关注的问题等。尽可能不在手术进行过程中临时申请快速活检。
标本的验收、编号参见本章中的相关规定，立即进行标本的巨检、取材和记录。
主持快速活检的病理医师应亲自参与标本的取材（或指导取材）。
通常选取1块或2块具有代表性的病变组织，需要时，增加取材块数。
临床医师如选送多部位的标本，均需一一取材。
（二）制片
低温恒冷冰冻切片法是目前最适用的方法，用于切片的组织块必须未曾固定。恒冷冰冻切片制片至少应于切片前1小时开机预冷，冷室温度一般为－25～－15℃。不同组织冷冻时所需的温度和时间略有不同，由各病理科掌握。常规开展冷冻切片快速病理诊断的病理科，恒冷箱切片机宜处于24小时恒温待机状态。完成冷冻HE 染色切片制备的时间通常为20～25分钟。
（1）冰冻组织取好后，在冷冻头上放少量的OCT 或羧甲基纤维素（可用普通胶水代替），放上组织，速冻。
（2）待组织冻结后，将冷冻头装到切片机上，粗切，修出切面细切几张，用毛笔刷去刀上组织片。
（3）放下抗卷板，开始切片，厚度一般为5～6μm，切出的组织片用载玻片贴附后立即放入乙醇、冰醋酸液（各病理科可自行选择）中固定，固定时间10～20秒。
（4）水洗，苏木素染色1分钟，水洗，盐酸乙醇分化1秒，水洗，温水蓝化，伊红2～5秒，梯度乙醇快速脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
快速石蜡切片法全部制片过程需30～40分钟。
（1）切取大小适宜的组织块，放入装有10ml4％中性甲醛的小烧杯中煮沸10秒，再固定1分钟，修成1mm 左右的薄片，移入水中，用滤纸压干组织中的水分。
（2）将组织块放入10ml纯丙酮中，煮沸2分钟，重复2次。
（3）吸除组织表面液体，置入60～70℃熔化的石蜡中，待组织下沉、不再出现气泡时（约需30秒）即可包埋。
（4）用热镊子将预制的蜡块表面熔化，埋入已经浸蜡的组织块，用载玻片压平组织，放在冰上冷却。
（5）常规石蜡切片，厚度4～5μm。切片捞于载玻片后加热10～15秒。
（6）放入二甲苯快速脱蜡（2道），梯度酒精法脱水。
（7）苏木素染色，方法见恒冷冰冻切片。
其他制片方法略。
四、快速报告的签发
负责快速活检的主检病理医师应了解患者的临床情况、手术所见、既往有关的病理学检查情况。
手术中快速活检应由经过该项工作训练的高年资主治医师以上的病理医师主持。有条件的病理科室由两位中、高级职称的病理医师共同签署快速活检的病理学诊断意见，对于病变疑难、手术切除范围广泛和会严重致残的手术中快速活检，应由两位具有高级职称的病理医师共同签署会诊意见。主检病理医师签名的字迹应能辨认。
快速活检诊断意见一般在收到送检标本后40分钟内发出，同时间段内相继收到的多例患者标本或是同一例患者的多次标本，其发出报告的时间以此类推。对于疑难病变，可酌情延时报告。
对于难以及时快速诊断的病变（如病变不典型、交界性肿瘤病变或送检组织不足以明确诊断等），主检病理医师应向手术医师说明情况，准确地签发病理学诊断意见或告知需要等待常规石蜡切片进一步明确病理学诊断。
主检病理医师签署的快速活检病理学诊断意见，宜以文字形式告之（具体发出方式由各医院自行决定）。快速活检病理学诊断意见报告书发出前应认真核对无误。
五、快速剩余组织的处理1冷冻切片后剩余的冷冻组织（简称“冻对“）和冷冻切片取材后剩余、未曾冷冻的组织（简称“冻剩“），均应保存，用于制备常规石蜡切片，以便与冷冻切片进行对照观察。
“冻对”、“冻剩”组织的蜡块和切片须编为同一号码。
当冷冻切片病理学诊断意见与其“冻对“组织的常规石蜡－HE 片的病理学诊断不一致时，该例病理学诊断一般应以石蜡－HE 片诊断为准。
病理组织学常规制片技术
一、组织的固定
凡需进行病理组织学检查的标本（器官或组织），离体（活体或尸体）后，应尽快置放（浸泡）于装有足够量固定液的容器中固定。固定液量应为被固定标本体积的5～10倍。放置标本的容器应比固定标本大一些。临床科室所取标本放置于容器中固定后，应尽快送病理科继续固定。未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制作切片。
常规固定液为4％中性甲醛（10％中性福尔马林）。小标本的固定时间为4～6小时，大标本固定18～24小时或更长时间。
据病理学特殊检查（特殊染色或组织化学染色、免疫组化染色和原位杂交染色、电镜观察等）的需要，应选用适宜的固定液进行固定。
器官、组织固定的基本方法
（1）食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔脏器：依规范方法剪开后，按其自然状态平铺于硬纸板上（重点暴露粘膜面或内表面的病变处），并用大头针将标本边缘处固定于纸板上，然后用4％中性甲醛固定（粘膜面或内表面朝向容器的液面，并覆盖薄层脱脂棉）。
（2）肝、脾：由器官背面，沿其长轴每间隔1.5～2.0cm 纵向平行剖开，切成数片。将每片肝或脾轻轻地平放于装有4％中性甲醛的容器中，容器底面衬以脱脂棉。应避免标本弯曲和相互间的叠压。
（3）肺叶：放入固定液中的肺叶漂浮于液面，须在肺表面覆盖浸含固定液的薄层脱脂棉。必要时从支气管注入适量4％中性甲醛。
（4）肾：沿肾外缘中线朝肾门方向做一水平切面（深达于肾盂），再行固定。
（5）淋巴结：先用4％中性甲醛固定1小时后，再沿其长轴切开（肿大的淋巴结可切成数片，厚2～3mm），继续固定。
（6）骨组织：先锯成小片（若是长骨应做横向锯片），在4％中性甲醛中固定24小时后，再进行脱钙。
（7）微小组织或液体沉淀物：先用试纸或滤纸妥为包裹（须用大头针扎牢），然后放入专用小盒内在4％中性甲醛内固定，以防检材遗失。
凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的病理检验号（病理号）。
多数固定液对人体有害，需要防护，必须在密闭的通风条件下进行操作。
组织块的切取和固定
（1）由较大标本切取用于制作切片的组织块（取材）时，应与标本的断面平行，组织块厚度一般为0.3cm（不应大于0.5cm），面积一般在（1～1.5）cm×（1～1.5）cm。
（2）切取组织块的形状，在充分包括肉眼所见病变的前提下尽量规则些（例如方形、矩形、三角形等）。由一个标本切取的多块组织的形状有所不同，便于蜡块与其相应切片的核对。
（3）固定组织块的固定液量，一般应为组织块总体积的5～10倍以上。
（4）室内常温（25℃左右）下的固定时间为3～24小时；低温（4℃）下的固定时间应延长。
（5）固定组织块的容器要大一些。
（6）组织块固定期间需要间断地轻摇或搅动固定液以利于固定液的渗入。
常用固定液
（1）4％中性甲醛（10％中性福尔马林）固定液甲醛（40％）100ml无水磷酸氢二钠6.5g磷酸二氢钠4.0g蒸馏水900ml（2）乙醇－甲醛（酒精－福尔马林，AF）固定液甲醛（40％）100ml95％乙醇900ml［说明］一般组织块经乙醇－甲醛固定1～2小时后，即可移入95％乙醇内脱水。
（3）Carnoy固定液
无水乙醇60ml氯仿30ml
冰醋酸10ml
［说明］本液是组织化学染色的常用固定液，组织经Carnoy液固定1～2小时后，即可移入95％乙醇中脱水。
（4）Zenker固定液
升汞5.0g重铬酸钾2.5g
硫酸钠1.0g蒸馏水（加至）100ml
［说明］配制本液时，先将升汞溶于蒸馏水中，加温至40～50℃溶解后，再加入重铬酸钾，最后加入硫酸钠，贮存待用。使用前加入5ml冰醋酸，混合。组织块需要固定12～24h。切片染色前，需要进行脱汞沉淀处理。
（5）Bouin固定液
饱和苦味酸水溶液（约1.22％）75ml
甲醛（40％）25ml
冰醋酸5ml
［说明］本液临用时配制。组织块置于Bouin液固定12～24小时即可（小块组织只需固定数小时）。经Bouin液固定的组织被苦味酸染成黄色，可用水洗涤12小时后进入乙醇脱水（兼脱色）。不必将组织中的黄色除净（残存于组织中的苦味酸无碍染色）。
（6）过碘酸－赖氨酸－多聚甲醛固定液（PLP）A 液：赖氨酸1.827g蒸馏水50ml0.1mol／L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）50ml B 液：8％多聚甲醛水溶液100ml［说明］本液临用时配制：取A 液3份、B 液1份，混合后加入过碘酸钠，使液体终浓度为2％。组织块在4℃下固定36～54小时。本液对细胞结构和抗原性保存较好。
（7）B5（醋酸钠－升汞－甲醛）固定液
无水醋酸钠1.25g
升汞6.0g
蒸馏水90ml
［说明］将以上物质混合、溶解，使用前加入甲醛10ml。本液多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。如不加甲醛称为B4固定液（蒸馏水为100ml）。
（8）丙酮固定液：冷丙酮（4℃）固定液用于酶组织化学染色。细胞标本的免疫组化染色也常用冷丙酮固定10分钟。
二、常规石蜡包埋组织切片（常规切片）的制备组织切片制备及其HE 染色过程中使用的乙醇、丙酮、二甲苯、石蜡等为易燃、有毒物，必须由专人管理，2m 以内不得有明火，局部环境应有良好的通风和消防设施。
（一）常规切片的手工操作
1.水洗用流水冲洗已经固定的组织块30分钟。
2脱水（常温下）
（1）乙醇－甲醛（AF）液固定：60～120分钟。
（2）80％乙醇：60～120分钟。
（3）95％乙醇Ⅰ：60～120分钟。
（4）95％乙醇Ⅱ：60～120分钟。
（5）无水乙醇Ⅰ：30～60分钟。
（6）无水乙醇Ⅱ：30～60分钟。
（7）无水乙醇Ⅲ：30～60分钟。
注意事项：①未经充分固定的组织不得进入脱水程序。②用于脱水的试剂容积应为组织块总体积的5～10倍以上。③自低浓度乙醇向高浓度乙醇梯度脱水。④脱水试剂应及时过滤、更换（500ml乙醇可用于500个组织块脱水；加入硫酸铜的无水乙醇变蓝时，提示需要更换）。⑤较大组织块的脱水时间长于较小者，应将两者分开进行脱水。⑥组织块置于无水乙醇内的时间不宜过长（以免硬化）。⑦丙酮脱水性能强，会使组织块过缩、硬脆，不宜用于替代无水乙醇。
3.透明
（1）二甲苯Ⅰ：20分钟。
（2）二甲苯Ⅱ：20分钟。
（3）二甲苯Ⅲ：20分钟。
注意事项：①二甲苯的容积应为组织块总体积的5～10倍以上。②组织块在二甲苯中透明的时间不宜过长（以防组织硬、脆），并依不同种类组织及其大小而异（组织块呈现棕黄或暗红色透明即可）。③二甲苯应及时过滤、更换。④组织块经二甲苯适度处理后不显透明时，常提示该组织的固定或脱水不充分，应查找原因并妥善处理。
