b.记录实验室干、湿度，绘制冰箱温度图。c.使用带有本区标识的记录本、纸和笔，每项记录，书写工整详细。d.将传入本区加样后的试剂上机扩增。e.扩增完成后，记录检测结果，及时发放报告单，记录仪器使用时间和运行状态。f.将本区所有废弃物分类装入垃圾袋，封口，在垃圾筐上套好新的垃圾袋，然后将垃圾带出实验室。g.将粉色工作服留在本室再离开实验室。h.严禁本区物品带至其他区，该区需维持负压状态，排气扇24小时排气，实验结束后清洁该区打开紫外灯照射，最好整夜消毒，记录紫外灯使用情况。
八、PCR废弃物的处理程序
（1）目的。保证实验室、实验人员和外部环境的安全。
（2）适用范围。核酸扩增荧光检测实验室常用化学试剂（NaOH、EDTA、乙醇、生理盐水等）、实验室废弃物的处理。
（3）负责人、操作人。
（4）细则。
①科室职责应对本室工作人员讲明本程序在预防交叉感染、实验室污染及切断传播途径中的重要性。
②实验室所有垃圾，装入专用污物袋内，各区备有：生活垃圾袋（黑色）及生物污染垃圾袋（黄色）。使用过的一次性消耗品（如试管、吸头、离心管、等），先放入10%次氯酸钠溶液中浸泡2～4h后，再放入黄色垃圾袋内，使用过的手套、鞋套等直接放入黄色垃圾袋内交医院集中处理。
③夹取标本的工具，如钳、镊、接种环、吸管等，用后均应消毒清洁，进行微生物检验时，应重新灭菌，金属工具可烧灼灭菌或消毒液浸泡；玻璃制品干热或压力蒸汽灭菌。
④一次性塑料痰盂，用2%戊二醛液浸泡2～4h后，放入黄色垃圾袋内交医院集中处理。
⑤废弃标本如血、尿、胸水、腹水、脑脊液、唾液、胃液、肠液、关节腔液等用10%的84液浸泡2～4h后，交医院集中处理。
⑥盛标本的容器，若为一次性使用的纸质容器及其外面包被的废纸，放入污物袋里交医院处理；对可再次使用的玻璃、塑料或搪瓷容器，煮沸15min或加入10%次氯酸钠溶液浸泡2～4h。
⑦废弃标本及其容器装入黄色垃圾袋内、封闭，交医院污物处理中心处理。
⑧日常生活垃圾如纸屑等按一般垃圾交医院处理。
九、基因扩增检测实验机结果分析
（1）目的。保证扩增及结果分析的标准化、规范化。
（2）适用范围。适用于本室使用的普通离心机。
（3）负责人、操作人。
（4）标准程序。
①基因扩增检测标准程序：扩增反应前须先在样本输入模板上按照事先排好的标本位置进行设置。每次实验除待检标本，还需包括：阴性对照、阳性对照、室内质控品各一份，一组阳性标准品（4个梯度108、106、105、104）。
操作程序：a.打开电脑电源开关，进入系统界面。b.接着打开PCR仪电源开关，预热5min。c.双击电脑桌面的ABIPrism5700SDSSoftware图标进入程序设置界面。d.单击“文件”菜单中的“新建”命令，（或单击工具栏中的“新建”按扭）。在测定、容器和模板中做相应的选择，点击OK。e.应用检测管理程序，并将其添加到样品板文档中。f.检测反应管。g.根据当次实验所需条件编辑时间和温度。运行样品板文档。
②结果分析标准程序。应按以下步骤进行：全部曲线——阴性对照——阳性对照——阳性室内质控品——阳性标准品——逐个分析（标出阳性标本和可疑标本）——调整参数，获得较好的标准曲线，显示定量结果——登记，发报告。a.整体曲线的观察：将所有曲线选中进行整体观察。观察是否存在污染情况（包括标本污染和试剂污染），特别应注意大量曲线在同一Ct值出现上涨的情况。b.观察是否有光路传导阻滞或电压波动等机器原因形成的异常曲线。
③阴性对照的分析。阴性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阴性标本。
④阳性对照的分析。阳性对照：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知阳性标本。
作用：用以监测实验能否正常检出阳性标本，避免假阴性的出现。
⑤室内质控品的分析。室内质控品：试剂中加入与待检标本进行同样处理的已知浓度室内质控品。作用：用以监控日常实验的精密度。
⑥阳性标准品的分析。a.各梯度曲线的分布是否均匀，若各梯度曲线均未分开，则表明阳模稀释可能存在问题，提示实验中存在较大人为误差。b.观察各曲线的Ct值是否在平日的正常位置。情况1：若出现低拷贝标准品做不出，而各曲线Ct值均后移，则判断是否为试剂扩增效率下降（如试剂过期或保存条件不合格）。情况2：出现低拷贝标准品做不出，而高拷贝曲线Ct值均正常，则提示可能存在低拷贝阳性标准品的降解情况。c.每日必做104标准品，用作以下三方面监控：一是否存在操作误差，如加样量过少等原因导致104标准品未能检出；二是否存在稀释后的梯度放置过久，低拷贝标准品降解的情况；三是若高拷贝标准品出现Ct值后移，且能排除情况1、2，则判断是否为试剂灵敏度下降。
⑦单个曲线的判断：逐个分析每条曲线，判断曲线的阴阳性或属可疑曲线。可疑标本是指曲线在25个Ct值后出现上涨且平台趋势不明显或上涨幅度比较低的标本。可疑标本要第二天重做，两次结果一致则报阳性，否则结果报阴性。
曲线观察内容：在基线选择2～8点观察荧光强度（是否有三期特征）。并分别在DeltaRnvs.Cycle、Ctvs.WellNumber和Rnvs.Cycle这三种扩增图形式下分析数据。
⑧得出定量结果：调节基线和阈值以得到一较好的标准曲线。电脑据此曲线给出阳性结果值。此时应排除某些阴性标本因荧光曲线假性上扬而得出的假阳性结果和某些弱阳性标本因终末荧光值过低而显示的假阴性。
⑨发放报告：及时登记检测结果记录，发放临床报告。
⑩实验结果无效的判断标准：出现下述四种情况中的任何一种或多种，当次实验结果不可发，查找原因，重做实验。
十、PCR应急处理程序
（1）目的。在实际工作中，仪器设备发生故障、试剂盒发生质量问题时，为保证检验结果的准确性、及时，应正确采取应急措施，最大程度上避免或减轻不利影响。
（2）适用范围。适用于满足核酸扩增荧光检测实验室检测需要并可能对检验结果造成误差的仪器设备和试剂盒。
（3）负责人。
（4）细则。
①核酸扩增荧光检测实验室工作人员在职责范围内均有责任熟悉各种仪器和相关设备的性能、要求、维护和保养、常见故障的排除、尤其要严格按照操作规程操作。
②工作人员在职责范围内均有责任有意识地注意以求及时发现并报告仪器设备和试剂盒的异常情况。
③作为应急处理，潜在着一定的可能影响检测质量的不确定因素。室负责人负责在第一时间检查核实应急措施的有效性。
④仪器设备故障。a.室负责人接到异常情况报警后，立即现场确认异常情况的性质：
观察有误、误操作、偶发现象或确属不能立即排除的故障。b.用红牌故障标志标示故障仪器，以防被错误使用。c.有满足要求的替用设备的，启用替用设备（准用仪器）。借用其他部门仪器设备时，及时联系借用并核实该设备的使用状态。替用、借用或备用设备的使用在满足质量要求的同时，必须同时满足实验室管理措施（特别是防污染）的要求。d.不能解决的问题，应及时与供应方会同解决。根据双方合同约定，及时通知供应方。供应方技术支持人员将在规定的时间内随身携带备用设备到达现场。e.仪器维修后，必须经验收合格并供需双方签字，调试实验通过后才能重新启用。取下红色故障标示（暂停使用），换上蓝色正常标示（正常使用）。f.室主任须检查并随时跟踪所采取措施的有效性。g.对未能及时排除故障时，必须及时上报科室，在科主任批准下，应积极联系附近的其他已得到卫生部临检中心认证的临床基因扩增检验实验室检验，以满足病人和临床或科研需求。
⑤试剂盒质量发生问题，经核实后，及时通知供货商迅速更换另一批次试剂，使用前需先作质量检测，合格后方可使用。
⑥仪器设备故障或试剂质量问题不能得到解决，预期将会影响到检测报告的及时发出，可将标本送至其他已得到卫生部临检中心认证的临床基因扩增检验实验室检查；如已影响到报告的及时发出，应在门诊取报告处向病人公告或向相关病区公告，取得病人的谅解。
⑦影响到检测报告发出的情况，应在应急处理记录表作记录。
十一、PCR室内质量控制标准操作程序。
（1）目的：随时了解并控制实验室检测的精密度变化。
（2）适用范围：核酸扩增荧光定量检测实验室。
（3）负责人、操作人。
（4）程序。
①血清质量控制品制备及操作。a.质控品制备。收集本室检测的临床样本，HBVDNA定量为106copies/ml的样本混匀，并分装于0.5ml的离心管中，每支110μl，编号后（如Qb0201-n），-20℃保存。b.操作。每次检测过程中将此分装的室内质控品与样本同时检测，记录此标本的检测结果；计算前10次检测结果的平均值作为本批质控品的靶值。
②室内质控图的使用方法。
一是描点法。a.图中X线为靶线，X±2s为警告线，X±3s为失控线。
对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其空图均不变化。只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。b.每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对应点，用直线将该点与前一天的点连接。c.月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV，并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档案。
二是图形分析法。a.如果在X±3s线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。b.如果在X±2s线以外，或出现连续6点以上在一侧等规律变化，均应即使向有关负责人反映，并积极查找原因。但当天的检验结果一般可以发出。c.通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源。
三是曲线漂移法：提示有系统误差，准确度发生了一次性的向上或向下改变。这种变化往往是由于一个新的情况引起的。如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。在找原因时，应重点注意“漂移”前后发生了那些变动的因素。
趋势性变化：向下或向上的趋势性变化表明检测的准确度发生了渐渐地变化。这种变化往往是由于一个逐渐改变的因素造成的。如质控血清的降解，试剂效价的降低等。
连续多点分布在靶值一侧：目前，一般认为质控血清的检测结果连续6d以上出现在靶值同一侧，则应迅速查找原因，争取尽快使之回复围绕在靶值随机分布的状态。因为按照统计学原理，由纯随机误差造成的这种情况的可能性很小。连续6d以上出现在靶值同一侧可能性小于1.5％。因此凡出现连续6d以上出现在靶值同一侧者均有可能存在非随机误差因素。如结果与靶值偏离并不太大，不会给临床使用带来太大影响时，一般检验报告可以照常填发。
四是通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源。a.每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的X和s与该批测定的X和s进行比较。如果X发生了变化，说明准确度发生了变化提示有非随机误差存在。如果当月s不同则表明检测的精密度发生了变化。b.将使用同一批号质控血清的CT值的X和s按月份列出。如果X逐月上升，应考虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。如果各月份X基本一致而s逐月加大，则主要提示常规工作的精密度下降，应重点从操作、管理上找原因。c.在数年中，把每个月的CV和失控规律列成表，可用作检测质量的历史性回顾及趋势分析。
十二、PCR室间质量控制操作程序
（1）目的。室间质评（EQA）是实验室质量控制体系中重要部分，是保证患者检验结果和其报告的准确性和可靠性，以及各实验室间结果的可比性的重要手段。
（2）适用范围。卫生部或省临检中心下发的PCR室间质控血清检测。
（3）负责人、操作人。
（4）程序。
①质控标本的接收和验收：收到质控血清后由相关人员登记、签字，根据质控标本的有关说明对血清的数量、批号、包装进行验收并将质控标本按要求置-20℃保存于标本制备区。
②质控标本的检测按常规临床标本对待，若需要，检测前先根据说明对质控物进行复溶。
③室间质评样本必须按实验室常规工作进行，由进行常规工作的人员测试，工作人员必须使用实验室的常规检测方法和试剂，不得特殊对待。检测结果须在截止日期前上报。
④实验室检测EQA样本的次数必须与常规检测病人样本的次数一样（即1次）。
⑤EQA样本的检测在部或省临检中心规定的时间内进行，检测结果的上报也必须在截止日期前，通过E-mail或挂号信寄出。
⑥室间质评的检测结果和反馈结果均记录于室间质评记录表，根据反馈结果分析室间质评的状态，如有出控应查找原因，并采取相应的措施。
⑦严禁与其他实验室交流室间质评的检测结果。
十三、实验室污染紧急防范措施。
（1）目的。保证实验室、实验人员和外部环境的安全。
（2）适用范围。对实验室污染采取的有效控制措施。
（3）操作人。
（4）操作。
①预防污染。a.实验人员持证上岗。b.实验试剂和设备的规范化和标准化。c.器械专用消耗品一次性专用。d.严格规范的操作程序。e.实验室规范化分区。f.设立严格的阴性质控。
②消除污染。a.停止实验。b.寻找污染源。c.通风：采用排风机排风，打开窗户或其他方式。d.用5%施康消毒台面。e.长时间（12h）以上用大剂量的紫外线照射实验台面及其他可以照射的仪器物品表面、室内空气。f.加样器的高压消毒。g.更换有污染的试剂。
h.如果是相关人员主观原因造成的，报请上级。对责任人追究责任，并积极整改。
（第二节）艾滋病初筛实验室的建设和管理
一、样品的采集和处理
（一）范围
本章规定了用于人免疫缺陷病毒（HIV）抗体检测的全血、血清、血浆、样品的采集和处理方法。
（二）规范性引用文件
《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断标准》中华人民共和国卫生行业标准WS293-2008GuidelinesforUsingHIVTestingTechnologiesinSurveillanceWHO/CDS/CSR/EDC/2008《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定》，卫生部第45号令2006年2月1日
（三）样品种类及相应的用途
